RNA與生命息息相關(guān)：mRNA是直接指導(dǎo)蛋白質(zhì)生物合成的模板，參與基因表達中的信息傳遞過程。近來的研究發(fā)現(xiàn)即使不參與蛋白編碼的RNA（ncRNA)也在積極發(fā)揮基因調(diào)節(jié)作用。ncRNA包括許多類型；包括小分子的miRNA與piRNA（Piwi相互作用RNA）與長分子的非編碼RNA（lncRNA）與環(huán)形RNA（circRNA）。

從檢測技術(shù)上講，檢測長鏈RNA與小分子RNA沒有本質(zhì)不同，都是基于靶分子與探針的雜交。但檢測小分子RNA的試劑有其獨特性，我們另做專章介紹。此處涉及到的RNA檢測適用于長度大于100nt的RNA，如mRNA、lncRNA或circRNA等的檢測。

 現(xiàn)已有多種檢測長鏈RNA的技術(shù)，包括用放射性標記的探針進行 RNA 印跡分析（Northern blotting），基于微陣列[12]和基于聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)的方法[13]，液相單細胞測定[14]，原位雜交[15-16]和高通量測序[17]等。然而，這些方法都有其固有的局限性。

Northern印跡法曾經(jīng)是檢測RNA的標準方法，可以檢測RNA的相對分子大小和豐度，但存在低通量、耗時長、易降解，敏感度較低等缺點，現(xiàn)在已較少應(yīng)用。

 實時定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)具有動態(tài)范圍大、靈敏度高、序列特異性強等優(yōu)點，已成為檢測miRNA表達的常規(guī)和可靠技術(shù)。 但qRT-PCR測定的RNA并非樣品的實際表達量，難于區(qū)分RNA的單核苷酸突變，并且還有假陽性等問題。

 微陣列技術(shù)是一種快速、高通量檢測RNAs的方法，但成本高、靈敏度低、對序列相似的RNA分辨差，也有假陽性問題。

 一些學(xué)者開發(fā)了各種等溫分析技術(shù)，包括滾環(huán)擴增（RCA），指數(shù)擴增反應(yīng)（EXPAR），環(huán)介導(dǎo)的等溫擴增（LAMP），雜交鏈反應(yīng)和催化發(fā)夾組裝。盡管這些測定具有簡單甚至無需儀器操作的優(yōu)點，但也存在限制其廣泛應(yīng)用的缺點，例如EXPAR和LAMP的非特異性擴增和高背景信號，以及雜交鏈反應(yīng)和催化發(fā)夾組裝的相對較慢的動力學(xué)和低靈敏低。

微奧基因（viagene）公司開發(fā)的快速 RNA Electrophoretic Fluorescence Assay (REFA) 技術(shù)提供了檢測RNA的另一種有力工具，有以下優(yōu)勢與特點。

1)靈敏度高：REFA使用高靈敏度的紅外標記探針，并采用特技術(shù)提高檢測靈敏度，使其能測定飛克摩水平的RNA（圖1）。

2) 快速出結(jié)果：微奧基因的獨特技術(shù)能夠使分子雜交在幾分鐘內(nèi)完成（Northern印跡需要雜交過夜），REFA測定能在2小時內(nèi)完成（圖2，時間安排）。

3) 操作簡便：REFA在現(xiàn)有RNA檢測方法中為最簡便的操作技術(shù)。

4）操作簡單與快速出結(jié)果（見操作說明書）能大大降低RNA降解。

5）分辨率高：REFA技術(shù)能夠提供靶分子大小信息，能夠區(qū)分RNA的單堿基突變（圖5）。

6）絕對量檢測：REFA測定的是單位樣品體積中的RNA絕對量，不涉及任何擴增放大。

7）定量檢測：REFA能夠?qū)λ鶞y定的RNA進行定量分析。

REFA所需要的試劑與條件：

1）能與靶分子配對雜交的熒光標記探針，客戶可與我們聯(lián)系，定制個性化探針。

2）需要能使探針與目標分子快速雜交的試劑以及用于檢測miRNA的電泳系統(tǒng)，微奧基因的即用kit已包括所有試劑。

3）需要自備小型垂直電泳系統(tǒng)，并按照使用說明配制REFA專用電泳凝膠。REFA專用專用預(yù)制膠或按照說明用Kit所帶試劑配置專用變性膠。

4）客戶需要自備能夠?qū)R700熒光進行圖像掃描的儀器，如Li Cor公司的Odyssey 掃描儀或任何能夠檢測700nm熒光的成像儀。

微奧基因的REFA Kits按標簽顯示的溫度存放，可以保存一年。