EMSA方法比較
微奧基因的基于化學(xué)發(fā)光的非放射性EMSA試劑與技術(shù)服務(wù)，已得到越來越多用戶的認(rèn)可。微奧基因公司的科學(xué)家并持續(xù)對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行改進(jìn)以期提供更多高效、快速、價(jià)低的實(shí)驗(yàn)試劑。 在對(duì)比各種EMSA測(cè)定方法中，我們發(fā)現(xiàn)基于地高辛標(biāo)記法的EMSA測(cè)定靈敏度低，操作繁瑣，耗時(shí)，我們決定不做與地高辛標(biāo)記有關(guān)的任何產(chǎn)品開發(fā)。另一方面，我們發(fā)現(xiàn)用近紅外熒光分子標(biāo)記的探針做EMSA測(cè)定，效果不錯(cuò)，但存在探針在國(guó)內(nèi)不易獲得，探針容易產(chǎn)生聚集等問題。為此，我們開發(fā)了基于近紅外熒光的EMSA試劑，并解決熒光探針標(biāo)記等問題。微奧基因現(xiàn)在能夠?qū)γ恳环N轉(zhuǎn)錄因子的EMSA測(cè)定提供三種不同測(cè)定方法的試劑供客戶選擇。下表列出每種測(cè)定方法的優(yōu)缺點(diǎn)及所需的儀器設(shè)備。在表下面，我們用示意圖解釋了每種測(cè)定方法的大致步驟及所需要的時(shí)間。請(qǐng)有需要的客戶結(jié)合各自的情況選用適當(dāng)?shù)脑噭腥魏我蓡枺?qǐng)與我們聯(lián)系。
1. 三種測(cè)定方法的比較
| 探針直染EMSA | 近紅熒光探針EMSA | 生物素探針EMSA | |
|---|---|---|---|
| 產(chǎn)品名 | gsEMSA-FK | irEMSA-FK | biEMSA-FK |
| 目錄號(hào) | gs+TF序列號(hào) | ir+TF序列號(hào) | bi+TF序列號(hào) |
| 所需探針 | 非標(biāo)記探針 | 近紅熒光標(biāo)記探針 | 生物素標(biāo)記探針 |
| Poly[dI:dC] | 不允許使用 | 一般都用 | 一般都用 |
| 凝膠電泳時(shí)間 | 1小時(shí)左右 | 1小時(shí)左右 | 1.5小時(shí)左右 |
| 必需儀器設(shè)備 | 電泳裝置，成像儀或掃描儀。 | 電泳裝置，熒光成像儀或掃描儀，推薦美國(guó)Li-Cor的近紅外掃描儀。 | 電泳裝置，DNA紫外交聯(lián)儀，X光膠片沖印設(shè)備或化學(xué)發(fā)光成像儀。 |
| 測(cè)定靈敏度 | 低 | 高 | 高 |
| 所需時(shí)間 | 2小時(shí) | 2.5小時(shí) | 5-6小時(shí) |
| DNA染液 | 需要 | - | - |
| 核蛋白用量 | 15-25ug | 2-5ug | 2-5ug |
| 適用樣品 | 僅用于純化蛋白 | 粗制樣品或純化蛋白均可 | 粗制樣品或純化蛋白均可 |
2. 三種測(cè)定方法的原理與主要步驟。
ECL/Biotin EMSA
IR (近紅外熒光）EMSA
探針直染EMSA
客服一號(hào)
